產(chǎn)品簡(jiǎn)介
本試劑盒基于 StarScript III 反轉(zhuǎn)錄酶開(kāi)發(fā)的，采用莖環(huán)結(jié)構(gòu)的逆轉(zhuǎn)錄引物與 miRNA 分子 3’ 端結(jié)合，在 StarScript III 反轉(zhuǎn)錄酶的作用下，獲得人為加長(zhǎng)的 miRNA 第一鏈 cDNA。
推薦使用通用的莖環(huán)序列為 5'-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGAC-3'，也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇其它莖環(huán)序列。通常情況下，逆轉(zhuǎn)錄引物只需在莖環(huán)序列上添加目的 miRNA 3’ 端的 6 個(gè)反向互補(bǔ)堿基即可。 此方法特異性高，只對(duì)成熟的 miRNA 進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，不受其前體干擾，序列高度同源的 miRNA 也可以精確區(qū)分。使用本產(chǎn)品獲得的逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可直接用于后續(xù)的染料法或探針?lè)晒舛繖z測(cè)。染料法推薦使用本公司的 2×RealStar Fast SYBR qPCR Mix（Cat#A301），探針?lè)ㄍ扑]使用本公司的 2×RealStar Fast Probe Mix（Cat#A351），以獲得更優(yōu)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品組分
| 組分名稱(chēng) | A237-02 | A237-10 |
|---|---|---|
| StarScript III miRNA-L Enzyme Mix | 20 μl | 100 μl |
| 2×StarScript III miRNA-L Buffer | 200 μl | 1 ml |
| U6 Stem-loop RT Primer (5 μM)a | 20 μl | 100 μl |
| U6 qPCR-F (10 μM)b | 20 μl | 100 μl |
| Universal miRNA qPCR-R (10 μM)c | 30 μl | 150 μl |
| Nuclease-free Water (DEPC-treated) | 1 ml | 1.5 ml |
a U6 Stem-loop RT Primer 為人、大鼠、小鼠通用的 U6 內(nèi)參的逆轉(zhuǎn)錄引物，其它物種或其它內(nèi)參需要根據(jù)物種序列重新設(shè)計(jì)。
b U6 qPCR-F 為人、大鼠、小鼠通用的 U6 內(nèi)參上游引物，可與通用下游引物 Universal miRNA qPCR-R 可在 qPCR 檢測(cè)搭配使用
c Universal miRNA qPCR-R 為通用莖環(huán)下游引物，在檢測(cè)目標(biāo) miRNA 時(shí)可設(shè)計(jì) qPCR 上游引物與之搭配使用。如需要更多引物量，請(qǐng)參考補(bǔ)充說(shuō)明 3 自行合成。
保存條件
-20℃ 保存，保質(zhì)期 12 個(gè)月。
數(shù)據(jù)展示
莖環(huán)法 miRNA 反轉(zhuǎn)錄示意圖
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